Iets meer dan een decennium na opening werd Route 66 vereeuwigd in John Steinbeck's De druiven der gramschap als "de moederweg, de weg van de vlucht" - een verwijzing naar de duizenden mensen die deze route aflegden tijdens de Grote Depressie. Twintig jaar na de opening had Nat King Cole een hit uit 1946 met "(Get Your Kicks on) Route 66 "; in de jaren zestig was er zelfs een gelijknamige tv-show.
In de jaren tachtig van de vorige eeuw waren automobilisten echter voorstander van bredere, snelere snelwegen met een hoge snelheid. Route 66 werd ontmanteld in 1985. Sindsdien is de snelweg onderworpen aan conserveringsinspanningen. Route 66 is, in de woorden van het Congres, "een symbool geworden van de Amerikaanse erfenis van reizen en hun erfenis van het zoeken naar een beter leven."
Er is een bepaalde nostalgie rond Route 66. Het roept glimmende auto's en old school-diners, attracties langs de weg en kitscherige verkeersborden op. Het is de laatste die het onderwerp is van het nieuwe boek Route 66 Kant en klare borden en advertenties, door Joe Sonderman en Jim Hinckley. Volgestouwd met beelden van vage borden, gerestaureerde neon- en geschilderde muurschilderingen, is het boek een eerbetoon aan de markeringen die tientallen reizigers onderweg waren door Amerika.